Plonger un écouvillon dans cette suspension et éliminer l'excès de liquide en tournant et pressant l'écouvillon contre la partie haute de la paroi du tube (la pression exercée est plus forte sur la partie haute sinon la tige de l'écouvillon se plie). Gélose — Wikipédia. Ensemencer, en stries serrées, avec l'écouvillon, la totalité de la surface du milieu dans trois directions (faire tourner la boite d'1/3 de tour entre chaque passage). Déposer les disques avec un distributeur ou bien à la pince en s'assurant qu'ils sont bien plaqués contre la gélose. Incuber en respectant les préconisations du CA-SFM/EUCAST: température, atmosphère et durée. Mesurer les diamètres d'inhibition autour des disques et les comparer aux diamètres critiques fixés par le CA-SFM/EUCAST afin de déterminer la catégorie clinique: S: sensible à dose standard SFE: sensible à forte exposition à l'antibiotique R: résistant Il faut également respecter certains délais: utiliser la suspension dans les 15 minutes qui suivent sa préparation et jamais au delà d'une heure.
Résultats: bien que quelques contaminants soient présents, il est possible de dénombrer, sur la plupart des boites, le nombres de colonies. Pour l'inoculum non chauffé: les colonies sont dues à la présence des formes végétatives Pour l'inoculum chauffé: les colonies sont dues aux spores qui ont été activées par le choc thermique, les formes végétatives ayant été détruites par la chaleur En savoir plus:
Cette association d'antibiotique inhibe la très grande majorité des bactéries à Gram négatif. Elle est particulièrement préconisée pour la recherche des streptocoques mais convient également aux autres bactéries à Gram positif comme les staphylocoques, les corynébactéries, les listéria. Atmosphère d'incubation Certains germes, pour lesquels la gélose au sang est préconisée, cultivent mieux en atmosphère enrichie en CO 2. C'est le cas tout particulièrement des streptocoques. C'est pourquoi, il est d'usage de les incuber en atmosphère enrichie en CO 2. Les géloses au sang permettent également la culture de nombreuses espèces de bactéries anaérobies strictes, si on a pris soin, bien sûr, d'incuber les boites en anaérobiose. Validation de méthode de l’identification des Pseudomonas non aeruginosa par. Étude du caractère hémolytique Cette étude repose sur l'aspect du milieu autour des colonies. Cet aspect dépend de 2 phénomènes: la lyse des hématies par les toxines bactériennes Le milieu devient plus ou moins tranparent. transparence totale dans le cas d'une hémolyse complète léger trouble dans le cas d'une hémolyse partielle la digestion plus ou moins complète de l'hémoglobine libérée La couleur du milieu dépendra du niveau de digestion de l'hémoglobine.
Revision of standards for adjusting the cation content of Mueller-Hinton broth for testing susceptibility of Pseudomonas aeruginosa to aminoglycosides De même, la thymidine inhibe l'activité des sulfamides et du triméthoprime. Il faut alors que la concentration de la thymidine ne dépasse pas 50 µg/L. Pour respecter cette condition, on choisit des matières premières pauvres en thymidine. Ce taux de thymidine est déterminé indirectement en mesurant le diamètre d'inhibition autour d'un disque de triméthoprime-sulfaméthoxazole (SXT) avec une souche d'Enterococcus faecalis ATCC 29212. L'activité de certains antibiotiques dépend aussi du pH. Le pH du milieu doit donc être contrôlé. La diffusion des antibiotiques contenus dans les disques dépend de l'épaisseur de la gélose et de sa concentration en agar. L'épaisseur de la gélose doit être de 4 mm et cela sur toute la surface de la boite (la gélose doit donc être coulée sur une surface bien horizontale). Il faut utiliser des géloses fraichement coulées et bien conservées pour éviter qu'elles se déshydratent.
La gélose au cétrimide est un milieu sélectif utilisé pour l' isolement et l'identification présomptive de Pseudomonas aeruginosa. Le pouvoir sélectif repose sur le cétrimide, un ammonium quaternaire capable d'inhiber un très grand nombre de bactéries. Cette gélose devient hautement sélective de Pseudomonas aeruginosa si on l'incube à 42°C. Cette gélose existe avec ou sans acide nalidixique. Grâce à une composition très proche de celle du milieu King A, ce milieu favorise la production de la pyocyanine et donc facilite le repérage des Pseudomonas aeruginosa. La pyocyanine est un pigment bleu produit par un très grand nombre de souches de Pseudomonas aeruginosa. Sur ce milieu, les souches de Pseudomonas aeruginosa produisent également un autre pigment, appelé pyoverdine ou fluoresceine. Ce pigment jaune-vert est fluorescent lorsque les cultures sont placées sous lampe UV. Composition de la gélose au cétrimide Peptone de gélatine 16, 0 g Peptone de caséine 10, 0 g Cétrimide 0, 2 g Acide nalidixique ou pas 15 mg Sulfate de potassium Chlorure de magnésium 1, 4 g Agar pH = 7, 1 Eau distillée qsp 1 L
Ce milieu contient des sels biliaires et du cristal violet qui permettent d'éliminer les bactéries à gram positif. Il contient de plus un indicateur de pH (rouge neutre) et le sucre dont on veut tester la fermentation ( lactose, sorbitol, arabinose, maltose... ). La dégradation par fermentation de ce sucre provoque une acidification qui fait virer la coloration des colonies au rose vif grâce à l'indicateur de pH. Les bactéries qui ne fermentent pas le sucre testé restent à pH neutre et ont une couleur beige. La gélose MacConkey est employée entre autres pour la culture des entérobactéries et du Pseudomonas aeruginosa. sur MacConkey (lactose +) Gélose chocolat [ modifier | modifier le code] Elle n'a rien à voir avec le chocolat. Sa couleur brune est due à une solution d'hémoglobine cuite qui entre dans sa composition. La gélose chocolatée est appropriée pour cultiver certaines bactéries exigeantes en termes de facteurs de croissance. En plus des globules rouges cuits qui libèrent des substances nutritives, la gélose chocolatée renferme souvent quelques additifs exigés par certaines bactéries.
> Milieu universel utilisé d'une part, pour la culture et l'isolement des bactéries aérobies et anaérobies et, d'autre part pour favoriser la croissance des germes particulièrement exigeants. Composition (g) pouvant être modifiée pour 1 litre de milieu: Tryptone: 15, 0 Peptone papaïnique de soja: 5, 0 Chlorure de sodium: 5, 0 Agar: 15, 0 pH du milieu prêt à l'emploi à 25 °C: 7, 3 ± 0, 2 caractéristiques Stockage: Mil. déshydraté: 2-30 °C Mil. préparé en flacons: 6 mois à 2-25 °C Mil. préparé en boîtes: 1 mois à 2-8 °C Mil. prêt à l'emploi: 6 mois à 10-25°c
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