Chromatographie sur couche mince. Download Report Transcript Chromatographie sur couche mince. Identification des composants de l'aspartame. 1 Identifier les différents composants de l'aspartame par chromatographie sur couche mince. 3 La chromatographie sur couche mince va permettre de séparer les constituants de l'aspartame en fonction de leur affinité pour deux phases non miscibles ( phase stationnaire et phase mobile). Révélation? Identification des acides aminés par chromatographie sur couche minceur. Sur une plaque de gel de silice de 5 x 9 cm, tracer légèrement et sans appuyer au crayon de papier une ligne de dépôt à 1, 5 cm du bord inférieur de la plaque Marquer très légèrement les emplacements des dépôts (6 dépôts) en laissant 0, 7 cm de chaque côté de la plaque et 0, 7 cm entre les dépôts Verser 15 mL d'un mélange de solvants nbutanol (75 Vol. ), acide acétique (20 Vol. ) et eau (20 Vol. ), soit une hauteur d'environ 1 cm de solvant. Attendre environ 10 minutes que les vapeurs de solvants saturent la cuve. Dissoudre deux comprimés d'aspartame dans 10mL d'eau déminéralisée.
Chromatographie: montage et vocabulaire Étape 1 Choix du support (phase fixe) et de l'éluant (phase mobile). Choix de la phase fixe (exemple: plaque d'aluminium recouverte de gel de silice). Choix de la phase mobile. C'est un solvant ou un mélange de solvants (exemple: dichlorométhane, éther de pétrole, etc. ). Étape 2 Préparation de la cuve à chromatographie et du support. CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (TLC): PRINCIPE ET PROCÉDURE - TIGE - 2022. On verse environ 0, 5 à 1 cm d'éluant dans la cuve à chromatographie que l'on referme avec un couvercle de manière à ce que l'éluant sature la cuve en vapeur. On trace alors un trait fin appelé ligne de dépôt (ou ligne de base) sur la plaque à chromatographie de manière à ce que ce trait soit au-dessus du niveau de l'éluant. Étape 3 Préparation des dépôts. Préparation de la ligne de base Sur la ligne de base, on doit réaliser les différents dépôts: le mélange; les témoins: ce sont les produits susceptibles d'entrer dans la composition du mélange. On respecte des espaces réguliers entre chaque dépôt. On place de fines croix à l'endroit de ces dépôts et on les repère par une lettre ou un nom.
3. La migration des analytes L'échantillon est déposé avec un capillaire sur la ligne de dépôt, préalablement tracée, de la plaque CCM qui est plongée dans la cuve contenant la phase mobile. Cette dernière s'élève par capillarité dans la phase stationnaire en emportant chaque analyte qui migre à sa propre vitesse en fonction de son affinité envers l'adsorbant et l'éluant. 4. L'interprétation des résultats Le facteur de rétention (Rf) est défini comme le rapport de la distance parcourue par l'analyte (d a) sur la distance parcourue par l'éluant (d s). Chromatographie sur couche mince: caractéristiques, à quoi ça sert - Science - 2022. Rf a = d a / d s Rf b = d b / d s Il en résulte un différentiel de rétention qui donne une idée de la séparation des composés pour des conditions opératoires données: ΔRf = Rf a – Rf b La zone idéale de séparation se trouve entre les valeurs 0, 1<= Rf<=0, 4, là où les facteurs de rétention correspondent à 2<= k <= 10 en chomatographie sur colonne. 5. Comparaison entre CCM et chromatographie liquide sur colonne Le transfert vers la chromatographie sur colonne impose de raisonner en volume de phase mobile nécessaire pour éluer les analytes.
Ensuite, elks sent titrites awe de la saude N/zoo en p&ewe du rouge de ph4nol. Avec les \*aleurs rencontrkes now unt: courbe qui est comparl:e 2 dvs courhrs &talons obtcnucs dans les mkmes conditions. CeIa nous yermet d'avoir un premier Wan qualitatif et q~aIititatif des acides prhents dans l'extrait (Figs. I, 2;. CHKOMATOGRAPHIE DES ACIDES ORGANIQUES BIOLOGIQIJES 247 30 4 60 Fig. T. &ides 80 100 prCsents dans l'extrait. Fig. 2. Voir la Fig. r (Forme HCOO-). 120 Chromatographie 160 180 200 220 240 sur colonne de r&sine (Forme CH, COO-). 260 C. Chyo~~~(~~y~~~h'~~7 SUY gel de silicc~ L'acide siliciquc qoc nous avons employ& (Mallinckrodt, x00 mesh) doit Ptr( &hit dans une btuve B roe'. pendant une nuit, a\-ant d'ctre utilist. On p&e S g cl'acick silicique et on ajoutt 5 ml de SO, H, 5 S en fractions de r ml. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche minces. T, a distril~~~tion dt l'acide sulfurique SW- l'acide silicique doit Ctrc kite goutte;I goutte (1'. Ixsaint. communication pcrsonnclle, Icjfxz). On homog6nirisc la poudrc a\w une baguette, ch:tque fois qu'on additionnr I ml de I'acidc, de fac;on & obtenir- unc po"dre homogitne non granulCe et hirn sPchr.
Cette r&sine est conservee au froid sous l'acide acetique 0. 1 N, etant d'&tre utilisee. Ensuite nous resumons la preparation de la resine utilisee dans les diffbentes formes (Tableau II). 11 faut remarquer que la quantite d'extrait a soumettre a une colonne de ne peut pas d&passer une acidite totale de 1. 5 mequiv. Nous avons utilise des colonnes en verre (diametre 18 mm, longueur 200 jusqu'a rincee pH 7, avant Ckn. Chim. Acta, II (1965) deux r&sine mm). 244-258 Rinpge abondant WCOOH H&J woc Hz0 3N JL&u'o" #i 7 I-ICI 1N tlCOONo 1N CH3COQNo I! Cours:La chromatographie sur couche mince "CCM". I$ Jusqu'b reaction negotif au NOaAg \ Aprk le passage de l'cstrait, il faut rincer la rhine, avec 1-2 1 d'eau, de faqon A retirer toutes les substances &antes acides. En suite, cm pro&de k I'Giution des substances acides cn utilisant un gradient variable selon la forme de la r&sine (Tableau 111). On utilise des collecteurs de fractions (mesure A vnlume constant) pour rccueillir les fractions de 2 ml en Erlenmeyers de IOU ml, et on IFS hapore dans le vide jwqu'& siccit6.
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